1. סיווג
אלקטרופורזה של ג'ל מחולקת לסוגים אנכיים (כולל ג'לים עמודים וג'לים לוחות) וסוגים אופקיים (בעיקר ג'לים לוחות) (איור 6-18). בדרך כלל, ההפרדה האנכית עדיפה במקצת מאופקית, אך להכנת ג'ל אופקית יש לפחות ארבעה יתרונות: ישנה תמיכה מתחת לג'ל כולו, המאפשרת שימוש באגרוז בריכוז נמוך; אפשר להכין צלחות ג'ל agarose של מפרטים שונים; הכנת ג'ל והעמסת דגימות נוחים יותר; תא האלקטרופורזה קל לבנייה וחסכוני. מכיוון שאלקטרופורסה אופקית מבוצעת כאשר צלחת הג'ל אגרוז שקועה במלואה כ-1 מ"מ מתחת לפני השטח של חיץ האלקטרופורזה, היא נקראת גם אלקטרופורזה שקועה.
מיכל אלקטרופורזה DYCP-31DN לאלקטרופורזה של ג'ל אגרוז
2. מערכת חוצץ
בהפרדת חומצות גרעין, רוב המערכות מאמצות מערכות רציפות. מאגרי אלקטרופורזה נפוצים כוללים TBE (0.08mol/L Tris·HCl, pH 8.5, 0.08mol/L חומצה בורית, 0.0024mol/L EDTA) ו-THE (0.04mol/L Tris·HCl, pH 7.8, 0.02mol/L נתרן אצטט, 0.0018 מול/ליטר EDTA) חיץ. מאגרים אלה מוכנים בדרך כלל כפתרונות מלאי פי 10 ומדללים לריכוז הנדרש בעת השימוש. שיעורי הנדידה של DNA ליניארי ועגול בג'ל אגרוז משתנים בהתאם למאגר המשמש. במאגר ה-THE, קצב הנדידה של DNA ליניארי גדול מזה של DNA מעגלי, בעוד שבמאגר TBE, ההפך הוא הנכון.
3.הכנת אגרוז ג'ל
(1) הכנת ג'ל אגרוז אופקי
(א) הכן את הריכוז הנדרש של ג'ל agarose באמצעות חיץ אלקטרופורזה 1x.
(ב) מחממים את האגרוז עד להמסה מלאה או באמבט מים רותחים, במערבל מגנטי או במיקרוגל. מצננים את תמיסת האגרוז ל-55 מעלות צלזיוס ומוסיפים צבע אתידיום ברומיד (EB) לריכוז סופי של 0.5 מיקרוגרם/מ"ל.
(ג) אטום את הקצוות של לוחות זכוכית או אקריליק בכמות קטנה של ג'ל אגרוז, הוסף מסרק והצב את שיני המסרק כ-0.5~1.0 מ"מ מעל הצלחת.
(ד) יוצקים את תמיסת הג'ל האגרוזה המומסת ברציפות לתוך תבנית הזכוכית או הצלחת האקרילית (העובי תלוי בנפח דגימת ה-DNA), תוך הימנעות מהחדרת בועות אוויר. תן לו להתמצק באופן טבעי בטמפרטורת החדר.
(ה) הסר בזהירות את המסרק לאחר התמצקות מלאה. הוסף כמות מתאימה של חיץ אלקטרופורזה למיכל הג'ל, וודא שצלחת הג'ל שקועה כ-1 מ"מ מתחת לפני השטח של חיץ האלקטרופורזה.
(2) הכנת ג'ל אגרוז אנכי
(א) הסר שומן או שאריות מלוחות זכוכית על ידי שטיפה באתנול.
(ב) הנח לוחות מרווחים בין הסכרים הקדמיים והאחוריים, יישר את הקצוות של לוחות המרווחים עם הסכרים הקדמיים והאחוריים, ואבטח אותם באמצעות מהדקים.
(ג) הוסף 2% agarose במאגר 1x בין הקצוות של צלחות המרווח כדי ליצור תקע אגרוז בגובה 1 ס"מ בתחתית תא יציקת הג'ל.
(ד) יוצקים את ג'ל האגרוז המומס בריכוז הרצוי, מוכן במאגר 1x, לתוך תא הג'ל עד 1 ס"מ מתחת לחלק העליון.
(ה) הכנס את המסרק, הימנעות מלכידת בועות אוויר מתחת לשיני המסרק. לפעמים, קמטים עשויים להופיע בשיני המסרק במהלך קירור ג'ל agarose; במקרים כאלה, פשוט הוסיפו מעט אגרוז מומס בחלק העליון כדי למצק אותו.
(ו) הסר את המסרק. כדי למנוע דליפת חיץ בחריץ הטעינה, אטום את החיבור בין צלחת ג'ל agarose לתא האלקטרופורזה עם 2% agarose והוסף את הכמות הנדרשת של חיץ.
(ז) הוסף חיץ אלקטרופורזה 1x לתא הג'ל.
(ח) בזהירות לטעון דגימות DNA על ג'ל agarose מתחת למאגר.
מידע נוסף על הידע הבסיסי על אלקטרופורזה של ג'ל אגרוז, נשתף בשבוע הבא. הלוואי שמידע זה יהיה מועיל לניסוי שלך.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) מתמחה בייצור מכשירי אלקטרופורזה כבר יותר מ-50 שנה עם צוות טכני ומרכז מו"פ מקצועי משלנו. יש לנו קו ייצור אמין ושלם מתכנון ועד בדיקה, ומחסן, כמו גם תמיכה שיווקית. המוצרים העיקריים שלנו הם תא אלקטרופורזה (טנק/תא), אספקת חשמל אלקטרופורזה, תאורת LED כחולה, תאורת UV, מערכת תמונה וניתוח ג'ל וכו'.
אנו מחפשים כעת שותפים, גם מיכל אלקטרופורזה OEM וגם מפיצים יתקבלו בברכה.
אם יש לך תוכנית רכישה כלשהי עבור המוצרים שלנו, אנא אל תהסס לפנות אלינו. אתה יכול לשלוח לנו הודעה במייל[מוגן באימייל]אוֹ[מוגן באימייל], או נא להתקשר אלינו בטלפון +86 15810650221 או הוסף Whatsapp +86 15810650221, או Wechat: 15810650221.
אנא סרוק את קוד ה-QR כדי להוסיף ב-Whatsapp או WeChat.
זמן פרסום: דצמבר 07-2023