אלקטרופורזה של ג'ל היא אחת השיטות העיקריות המשמשות בביולוגיה מולקולרית לניתוח DNA. שיטה זו כוללת נדידה של שברי DNA דרך ג'ל, שם הם מופרדים על סמך גודל או צורה. עם זאת, האם אי פעם נתקלת בשגיאות כלשהן במהלך ניסויי האלקטרופורזה שלך, כגון רצועות מרוחות על הג'ל אגרוז, או ללא רצועות על הג'ל? מה יכולה להיות הסיבה לטעויות אלו?
הטכנאים שלנו סיכמו כאן כמה פתרונות תקלות לעיונך.
1. מרוח רצועות על ג'ל אגרוז
●ה-DNA הושפל. הימנע מזיהום נוקלאז.
● מאגר האלקטרופורזה אינו טרי. לאחר שימוש חוזר במאגר אלקטרופורזה, חוזק היוני פוחת, וערך ה-pH שלו עולה, כך שכושר החיץ נחלש, מה שמשפיע על אפקט האלקטרופורזה. מומלץ להחליף את חיץ האלקטרופורזה בתדירות גבוהה.
● נעשה שימוש בתנאי אלקטרופורזה לא נאותים. אל תאפשר למתח לעלות על 20 וולט/ס"מ, ושמור על טמפרטורה מתחת ל-30 מעלות צלזיוס במהלך האלקטרופורזה. עבור אלקטרופורזה ענקית של גדיל DNA, הטמפרטורה צריכה להיות מתחת ל-15 מעלות צלזיוס. בדוק שלמאגר האלקטרופורזה יש מספיק קיבולת חיץ.
● יותר מדי DNA הוטען על הג'ל. הפחת את כמות ה-DNA.
● יותר מדי מלח ב-DNA. השתמש במשקעים אתנול כדי להסיר עודפי מלחים בשלב מתקדם.
● ה-DNA היה מזוהם בחלבון. השתמש במיצוי פנול כדי להסיר חלבון בשלב מתקדם.
● ה-DNA עבר דנטורציה. אין לחמם לפני אלקטרופורזה. דלל DNA במאגר עם 20 מ"מ NaCl.
2. אנומליות נדידת להקת DNA
● רנטורציה של אתר COS של שבר λHind III. לחמם את ה-DNA במשך 5 דקות מתחת ל-65 מעלות צלזיוס לפני האלקטרופורזה, ולאחר מכן לקרר אותו על יחידת קרח למשך 5 דקות.
● נעשה שימוש בתנאי אלקטרופורזה לא נאותים. אל תאפשר למתח לעלות על 20 וולט/ס"מ, ושמור על טמפרטורה מתחת ל-30 מעלות צלזיוס במהלך האלקטרופורזה. בדוק שלמאגר האלקטרופורזה יש מספיק קיבולת חיץ.
● ה-DNA עבר דנטורציה. אין לחמם לפני אלקטרופורזה. דלל DNA במאגר עם 20 מ"מ NaCl.
3. רצועות DNA חלשות או חסרות על ג'ל אגרוז
● לא הייתה כמות או ריכוז מספיקים של DNA שהוטען על הג'ל. הגדל את כמות ה-DNA. אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד היא מעט יותר רגישה מאלקטרופורזה של אגרוז, וניתן להפחית את העמסת הדגימות כראוי.
● ה-DNA הושפל. הימנע מזיהום נוקלאז.
● ה-DNA עבר אלקטרופורזה מהג'ל. אלקטרופורי את הג'ל למשך פחות זמן, השתמש במתח נמוך יותר, או השתמש באחוז ג'ל גבוה יותר.
● מקור אור W לא תקין שימש להדמיה של DNA מוכתם באתידיום ברומיד. השתמש באור W באורך גל קצר (254 ננומטר) לקבלת רגישות רבה יותר.
4. חסרות להקות DNA
●ה-DNA בגודל קטן עבר אלקטרופורזה מהג'ל. אלקטרופורי את הג'ל למשך פחות זמן, השתמש במתח נמוך יותר, או השתמש באחוז ג'ל גבוה יותר.
● קשה להבחין בין רצועות ה-DNA של מולקולריות דומות. הגדל את זמן האלקטרופורזה, ובדוק את הריכוזשל הג'ל כדי לוודא שאחוז הג'ל ישמש כראוי.
● ה-DNA עבר דנטורציה. אין לחמם לפני אלקטרופורזה. דלל DNA במאגר עם 20 מ"מ NaCl.
● גדילי ה-DNA עצומים, ואלקטרופורסית ג'ל קונבנציונלית אינה מתאימה. ניתוח על אלקטרופורזה של ג'ל דופק.אילו בעיות נוספות היו לך עם אלקטרופורזה בג'ל אגרוז? אנו נחקור יותר עבור מדריכים בעתיד.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) היא חברה מתמחה המתמקדת במוצרים הקשורים לאלקטרופורזה בסין. הסיפור שלה מתחיל ב-1970 כשסין עדיין לא נכנסה לרפורמה וזמן הפתיחה. לאורך שנים, ל-Liuyi Bitotech יש מותג משלה, הידוע כמותג Liuyi בשוק המקומי של מוצרי אלקטרופורזה.
למותג Liuyi יש יותר מ-50 שנות היסטוריה בסין והחברה יכולה לספק מוצרים יציבים ואיכותיים בכל רחבי העולם. דרך פיתוח של שנים, זה ראוי לבחירתך!
תאי האלקטרופורזה האופקיים (מכלים/תאים) של Liuyi Biotech הם באיכות גבוהה עם מראה טוב. עם גדלים שונים של מגשי ג'ל, הם יכולים לעמוד בדרישות הניסוי השונות שלך. יש לנו צוות טכני ומפעל משלנו. מהתכנון לייצור, מחומרי הגלם ועד לחלקי המפתח, אנחנו יכולים לשלוט על כל התהליך. סדרת DYCP 31 מיועדת לאלקטרופורזה של DNA, שהם מודלDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, וDYCP-31E. ההבדלים ביניהם הם גדלי ג'ל ומחיר. אנו מספקים מוצרים בגדלים מלאים ללקוחותינו. הדגםDYCP-32Cיכול לעשות את הג'ל הגדול ביותר 250 מ"מ * 250 מ"מ.
בינתיים, אנו ממליצים על ספק כוח האלקטרופורזה שלנוDYY-6C,DYY-6DוDYY-10Cלתאי האלקטרופורזה שלנו (טנקים/תאים) סדרת DYCP-31 ו-32.
אם אתה רוצה מידע נוסף על המוצרים, אנא בקר באתר זה כדי לקבל עוד, ומוזמן ליצור איתנו קשר באמצעות דואר אלקטרוני כדי ליידע אותנו מה אתה רוצה, ולראות אם נוכל לספק את הפתרונות עבורך.
למידע נוסף עלינו, אנא צור איתנו קשר במייל[מוגן באימייל], [מוגן באימייל].
זמן פרסום: מאי-09-2022