ניסוי אלקטרופורזה של המוגלובין

עקרון הניסוי

אלקטרופורזה של המוגלובין נועדה לזהות ולאשר המוגלובינים שונים נורמליים וחריגים.

בשל המטענים והנקודות האיזו-אלקטריות השונות מסוגי המוגלובין שונים, בתמיסת חיץ pH מסוימת, כאשר הנקודה האיזואלקטרית של המוגלובין נמוכה מה-pH של תמיסת המאגר, ההמוגלובין נושא מטען שלילי ונודד לעבר האנודה במהלך האלקטרופורזה. לעומת זאת, המוגלובין עם מטען חיובי נע לכיוון הקתודה.

תחת מתח מסוים ולאחר זמן אלקטרופורזה מסוים, המוגלובינים בעלי מטענים ומשקלים מולקולריים שונים מציגים כיווני נדידה ומהירויות שונות. זה מאפשר הפרדה של אזורים נפרדים, וניתן לבצע ניתוח סריקה קולורימטרי או אלקטרופורטי על אזורים אלה כדי לכמת המוגלובינים שונים. השיטה הנפוצה ביותר היא אלקטרופורזה של ממברנת תאית אצטט pH 8.6.

בתוך הציטופלזמה, קבוצות אתילן גליקול (CHOH-CHOH) הקיימות בחומרי גליקוגן או פוליסכרידים (כגון מוקופוליסכרידים, מוקופרוטאינים, גליקופרוטאין, גליקוליפידים וכו') מתחמצנות על ידי חומצה מחזורית והופכות לקבוצות אלדהיד (CHO-CHO). קבוצות אלדהיד אלו משתלבות עם ריאגנט ה-Schiff חסר הצבע ארגמן-אדום, ויוצרות צבע סגול-אדום שמתמקם במקום שבו נמצאים פוליסכרידים בתא. תגובה זו ידועה כצביעת חומצה-שיף מחזורית (PAS), שנקראה בעבר צביעת גליקוגן.

שיטת ניסוי

חומרים:תאית אצטטמברין, מנגנון אלקטרופורזה(DYCP-38C וספק כוח DYY-6C), כלי טעינת מדגם מעולה (פִּיפֵּטָה), ספקטרופוטומטר, קובטות קולורימטריות, חוצצים.

בַּלָם:

(1) מאגר pH 8.6 TEB: שקלו 10.29 גרם טריס, 0.6 גרם EDTA, 3.2 גרם חומצה בורית, והוסיפו מים מזוקקים ל-1000 מ"ל.

(2) מאגר בוראט: שקלו 6.87 גרם בורקס ו-5.56 גרם חומצה בורית, והוסיפו מים מזוקקים ל-1000 מ"ל.

נוֹהָל:

Pתיקון תמיסת המוגלובין

קח 3 מ"ל דם המכיל הפרין או נתרן ציטראט כחומר נוגד קרישה. צנטריפוגה ב-2000 סל"ד למשך 10 דקות והשליך את הפלזמה. שטפו את תאי הדם האדומים שלוש פעמים עם מי מלח פיזיולוגי (750 סל"ד, 5 דקות צנטריפוגה בכל פעם). צנטריפוגה ב-2200 סל"ד למשך 10 דקות והשליך את הסופרנטנט. הוסף כמות שווה של מים מזוקקים, ולאחר מכן הוסף פי 0.5 מנפח הפחמן טטרכלוריד. נער נמרצות במשך 5 דקות, ולאחר מכן צנטריפוגה ב-2200 סל"ד למשך 10 דקות כדי לאסוף את תמיסת Hb העליונה לשימוש מאוחר יותר.

השריית הממברנה

חותכים את קרום התאית אצטט לרצועות בגודל 3 ס"מ × 8 ס"מ. יש להשרות אותם במאגר pH 8.6 TEB עד לרוויה מלאה, ולאחר מכן להסיר ולייבש בנייר סינון.

תַצְפִּית

השתמש בפיפטה כדי לזהות 10 μl מתמיסת ההמוגלובין בצורה אנכית על קרום אצטט תאית (הצד המחוספס), כ-1.5 ס"מ מהקצה.

אלקטרופורזה

יוצקים את פתרון חיץ בוראט לתוך תא האלקטרופורזה. מניחים את קרום אצטט תאית עם הצד המנוקד בקצה הקתודה של החדר. הפעל על 200 וולט למשך 30 דקות.

שחרור

חתכו את אזורי ה-HbA וה-HbA2, הניחו אותם במבחנות נפרדות והוסיפו 15 מ"ל ו-3 מ"ל מים מזוקקים, בהתאמה. נער בעדינות כדי לחסל את ההמוגלובין לחלוטין, ואז ערבב.

קולורימטריה

אפס את הספיגה באמצעות מים מזוקקים לתמיסת האלוציה ומדוד את הספיגה ב-415 ננומטר.

תַחשִׁיב

HbA2(%) = ספיגה של צינור HbA2 / (ספיגה של צינור HbA × 5 + ספיגה של צינור HbA2) × 100%

חישוב תוצאות ניסוי

טווח התייחסות עבור pH 8.6 TEB Buffer תאית אצטט אלקטרופורזה: HbA > 95%, HbA2 1%-3.1%

הערות

זמן האלקטרופורזה לא צריך להיות ארוך מדי. קרום אצטט תאית לא אמור להתייבש במהלך אלקטרופורזה. הפסק אלקטרופורזה כאשר HbA ו-HbA2 מופרדים בבירור. אלקטרופורזה ממושכת עלולה לגרום לדיפוזיה וטשטוש פסים.

הימנע משימוש ביותר מדי דגימה. עודף נוזל המוגלובין עלול להוביל להינתקות פס או לצביעה לא מספקת, וכתוצאה מכך רמות HbA מוגברות באופן שגוי.

למנוע זיהום של קרום אצטט תאית עם חלבונים.

הזרם לא צריך להיות גבוה מדי; אחרת, ייתכן שרצועות המוגלובין לא ייפרדו.

כלול תמיד דגימות מאנשים נורמליים והמוגלובינים מוכרים לא תקינים כביקורת.

Beijing Liuyi Biotechnology מייצרת את מיכל האלקטרופורזה המקצועי לאלקטרופורזה המוגלובין שהוא הדגםDYCP-38Cמיכל אלקטרופורזה של ממברנת תאית אצטט, ויש שני דגמים של ספק כוח אלקטרופורזה זמינים עבור מיכל האלקטרופורזה של ממברנת תאית אצטטDYY-2CוDYY-6Cספק כוח.

בינתיים, Beijing Liuyi Biotechnology מספקת ממברנת תאית אצטט ללקוחות, וניתן להתאים את הגודל של קרום אצטט תאית. מוזמן לבקש מאיתנו דוגמאות ומידע נוסף.

למותג Beijing Liuyi יש היסטוריה של יותר מ-50 שנה בסין והחברה יכולה לספק מוצרים יציבים ואיכותיים בכל רחבי העולם. לאורך שנים של פיתוח, זה ראוי לבחירתך!

אנו מחפשים כעת שותפים, גם מיכל אלקטרופורזה OEM וגם מפיצים יתקבלו בברכה.

אם יש לך תוכנית רכישה כלשהי עבור המוצרים שלנו, אנא אל תהסס לפנות אלינו. אתה יכול לשלוח לנו הודעה במייל[מוגן באימייל]אוֹ[מוגן באימייל], או נא להתקשר אלינו בטלפון +86 15810650221 או הוסף Whatsapp +86 15810650221, או Wechat: 15810650221