מהי אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד?

אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד

אלקטרופורזה של ג'ל היא טכניקה בסיסית במעבדות על פני הדיסציפלינות הביולוגיות, המאפשרת הפרדה של מקרומולקולות כגון DNA, RNA וחלבונים. מדיות ומנגנוני הפרדה שונים מאפשרים להפריד תת-קבוצות של מולקולות אלו בצורה יעילה יותר על ידי ניצול המאפיינים הפיזיים שלהן. עבור חלבונים בפרט, אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד (PAGE) היא לעתים קרובות הטכניקה המועדפת.

PAGE היא טכניקה המפרידה בין מקרומולקולות כגון חלבונים על סמך הניידות האלקטרופורטית שלהן, כלומר, היכולת של אנליטים לנוע לעבר אלקטרודה בעלת המטען ההפוך. ב-PAGE זה נקבע לפי המטען, הגודל (משקל מולקולרי) וצורת המולקולה. אנליטים נעים דרך נקבוביות שנוצרו בג'ל פוליאקרילאמיד. בניגוד ל-DNA ול-RNA, המטען של חלבונים משתנה בהתאם לחומצות האמינו המשולבות, מה שיכול להשפיע על אופן פעולתם. מיתרי חומצות אמינו עשויים גם ליצור מבנים משניים המשפיעים על גודלם הנראה וכתוצאה מכך על האופן שבו הם מסוגלים לנוע דרך הנקבוביות. לכן ייתכן שלעתים יהיה רצוי לבצע דנטורציה של חלבונים לפני אלקטרופורזה כדי ליניאריזם אם נדרשת אומדן מדויק יותר של הגודל.

עמוד SDS

אלקטרופורזה של ג'ל פולי-אקרילאמיד נתרן-דודציל סולפט היא טכניקה המשמשת להפרדת מולקולות חלבון בעלות מסה של 5 עד 250 kDa. החלבונים מופרדים אך ורק על בסיס משקלם המולקולרי. סודיום דודציל סולפט, חומר פעיל שטח אניוני, מתווסף בהכנת ג'לים המסווה את המטענים הפנימיים של דגימות החלבון ומעניק להן יחס מטען למסה דומה. במילים פשוטות, הוא מדנט את החלבונים ונותן להם מטען שלילי.

PAGE מקורי

Native PAGE היא טכניקה המשתמשת בג'לים ללא דנטורציה להפרדת חלבונים. שלא כמו SDS PAGE, לא מוסיפים חומר דנטורציה בהכנת ג'לים. כתוצאה מכך, הפרדת החלבונים מתבצעת על בסיס מטען וגודל החלבונים. בטכניקה זו, הקונפורמציה, הקיפול ושרשראות חומצות האמינו של החלבונים הם הגורמים שההפרדה תלויה בהם. החלבונים אינם נפגעים בתהליך זה, וניתן לשחזר אותם לאחר השלמת ההפרדה.

כיצד פועלת אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד (PAGE)?

העיקרון הבסיסי של PAGE הוא להפריד אנליטים על ידי העברתם דרך הנקבוביות של ג'ל פוליאקרילאמיד באמצעות זרם חשמלי. כדי להשיג זאת, תערובת אקרילאמיד-ביסקרילאמיד עוברת פילמור (פוליאקרילאמיד) על ידי הוספת אמוניום פרסולפט (APS). התגובה, אשר מזורזת על ידי tetramethylethylenediamine (TEMED), יוצרת מבנה דמוי רשת עם נקבוביות שדרכן אנליטים יכולים לנוע (איור 2). ככל שאחוז סך האקרילאמיד הכלול בג'ל גבוה יותר, כך גודל הנקבוביות קטן יותר, ולכן החלבונים שיוכלו לעבור דרכם קטנים יותר. היחס בין אקרילאמיד לביסקרילאמיד ישפיע גם על גודל הנקבוביות, אך לרוב זה נשמר קבוע. גדלי נקבוביות קטנים יותר גם מפחיתים את המהירות שבה חלבונים קטנים מסוגלים לנוע דרך הג'ל, משפרים את הרזולוציה שלהם ומונעים מהם לברוח אל המאגר במהירות בעת הפעלת זרם.

ציוד לאלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד

תא אלקטרופורזה של ג'ל (טנק/תא)
מיכל הג'ל לאלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד (PAGE) שונה ממיכל ג'ל אגרוז. מיכל הג'ל agarose הוא אופקי, ואילו מיכל ה-PAGE הוא אנכי. על ידי תא אלקטרופורזה אנכי (טנק/תא), ג'ל דק (בדרך כלל 1.0 מ"מ או 1.5 מ"מ) נשפך בין שתי לוחות זכוכית ומורכב כך שחלק התחתון של הג'ל שקוע במאגר בתא אחד והחלק העליון שקוע במאגר בחדר אחר. כאשר מופעל זרם, כמות קטנה של חיץ נודדת דרך הג'ל מהחדר העליון לתא התחתון. עם מהדקים חזקים כדי להבטיח שההרכבה תישאר במצב זקוף, הציוד מקל על ריצות ג'ל מהירות עם קירור אחיד וכתוצאה מכך להקות ברורות.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotechnology) מייצרת מגוון גדלים של תאי אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד (מכלים/חדרים). הדגמים DYCZ-20C ו-DYCZ-20G הם תאי אלקטרופורזה אנכיים (מכלים/תאים) לניתוח רצף DNA. חלק מתאי האלקטרופורזה האנכיים (מכלים/חדרים) תואמים למערכת סופג, כמו הדגם DYCZ-24DN, DYCZ-25D ו-DYCZ-25E תואמים למערכת Western Blotting דגם DYCZ-40D, DYCZ-40G ו-DYCZ-40F, המשמשים להעברת מולקולת החלבון מהג'ל לממברנה. לאחר אלקטרופורזה של SDS-PAGE, Western Blotting היא טכניקה לזיהוי חלבון ספציפי בתערובת חלבון. אתה יכול לבחור מערכות סופג אלה בהתאם לדרישות הניסוי.

ספק כוח אלקטרופורזה
כדי לספק את החשמל להפעלת הג'ל, תזדקק לאספקת חשמל אלקטרופורזה. ב-Liuyi Biotechnology אנו מספקים מגוון של ספקי כוח אלקטרופורזה לכל היישומים. הדגם DYY-12 ו-DYY-12C עם מתח וזרם יציב גבוה יכולים לעמוד באלקטרופורזה של דרישות מתח גבוה. יש לו את הפונקציה של מעמד, תזמון, VH ויישום שלב אחר שלב. הם אידיאליים ליישום אלקטרופורזה של IEF ו-DNA. ליישום אלקטרופורזה כללית של חלבון ו-DNA, יש לנו את הדגם DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 וכן הלאה, שהם גם ספקי כוח מכירה חמים עם תאי אלקטרופורזה (מכלים/תאים). אלה יכולים לשמש עבור יישומי אלקטרופורזה במתח בינוני ונמוך, כגון לשימוש במעבדות בית ספר, מעבדת בית חולים וכן הלאה. דגמים נוספים עבור ספקי כוח, אנא בקר באתר האינטרנט שלנו.

למותג Liuyi יש יותר מ-50 שנות היסטוריה בסין והחברה יכולה לספק מוצרים יציבים ואיכותיים בכל רחבי העולם. דרך פיתוח של שנים, זה ראוי לבחירתך!

למידע נוסף עלינו, אנא צור איתנו קשר במייל[מוגן באימייל] or [מוגן באימייל].

הפניות לגבי מהי אלקטרופורזה של ג'ל פוליקרילאמיד?
1. Karen Steward PhD אלקטרופורזה של ג'ל פוליאקרילאמיד, איך זה עובד, גרסאות טכניקה והיישומים שלה