עִקָרוֹן
אלקטרופורזה של סרט תאית אצטט היא שיטת אלקטרופורזה המשתמשת בסרט תאית אצטט כתמיכה.התופעה שבה חלקיקים טעונים נעים לעבר האלקטרודה הנגדית תחת פעולת השדה החשמלי נקראת אלקטרופורזה.מכיוון שלכל חלבון יש נקודה איזואלקטרית ספציפית, אם שמים חלבון בתמיסה עם pH נמוך מהנקודה האיזואלקטרית שלו, החלבון יהיה טעון חיובי וינוע לעבר האלקטרודה השלילית.להיפך, הוא עובר לקוטב החיובי.מכיוון שמהירות מולקולות החלבון הנעות בשדה חשמלי קשורה למטען שלהן, לצורתן ולגודלן של המולקולות, ניתן להפריד חלבונים שונים באמצעות אלקטרופורזה.הסרום מכיל מגוון של חלבונים, שלכולם נקודות איזואלקטריות ב-pH7.5 או פחות.כאשר שמים את הסרום במאגר pH 8.6 כדי להפעיל אלקטרופורזה, כל חלבוני הסרום טעונים שלילי וינועו לעבר הצד החיובי בשדה החשמלי.מכיוון שלחלבונים שונים בסרום יש מטענים שונים באותו pH, החלקיקים המולקולריים שונים בגודלם, ולכן מהירות הנדידה שונה, והם מופרדים על ידי אלקטרופורזה.הנקודות האיזואלקטריות והמשקלים המולקולריים של חלבוני סרום מוצגים בטבלה שלהלן:
| חֶלְבּוֹן | נקודות איזואלקטריות (PI) | משקל מולקולרי |
| אלבומין | 4.88 | 69,000 |
| α1-גלולין | 5.00 | 200,000 |
| α2-גלולין | 5.06 | 300,000 |
| β-גלולין | 5.12 | 9,000~150,000 |
| γ-גלולין | 6.85~7.50 | 156,000~ 300,000 |
הניסוי הוא להפריד חלבונים שונים בסרום הדם עם קרום אצטט תאית (ראשי תיבות CAM) כאמצעי תמיכה.CAM הוא סוג של לוס מוקצףeסרט עם אחיד טוב, והעובי הוא 0.1 מ"מ-1.5 מ"מ, שיש לו ספיגת מים מסוימת.
חומרים, מכשירים וריאגנטים עבור CAM Electrophoresis
דגימות:סרום דם אנושי בריא
כלי:ספק כוח DYY-6C, מיכל אלקטרופורזה DYCP-38C, טעינת מדגם מעולה WD-9404
הריאגנטים
1) קרום אצטט תאית 7X9 ס"מ
2) תמיסת חיץ ברביטול PH 8.6 (חוזק יוני 0.05-0.09, זה זמן של 0.06טי.): קח 1,84 גרם חומצה דיאתיל ברביטורית, ולאחר מכן קח 1.03 גרם דיאתיל נתרן פנטוברביטל, הוסף מעט מים מזוקקים לחימום כדי להתמוסס, והכין עד 1000 מ"ל;
3) כתם: Ponceau S 0.2g, Trichloroacetic 3g, הוסף 100ml מים מזוקקים;
4) TBS/T או PBS/T: 45 מ"ל 95% אתנול, 5 מ"ל חומצה קרחונית, הוסף 50 מ"ל מים מזוקקים;
5) תמיסת ניקוי: 70 מ"ל אתנול נטול מים, 30 מ"ל חומצה קרחונית.
ניסוי Method
1) הכן את הממברנה: לטבול את הממברנה בתמיסת המאגר הברביטול 30 דקות-8 שעות, ולהוציא אותה החוצה, להסיר את התמיסה הנוספת על ידי נייר סופג.
2) טעינת דוגמאות: הבדיל בין הצד המחוספס והצד החלק של הממברנה, וסמן קו במרחק של 1.5 ס"מ לקצה העליון בצד המחוספס.טען דגימות על ידי כלי טעינת דגימות מעולה בצד המחוספס.הערה: יש לטעון את הדגימות על הצד המחוספס של הממברנה.לאחר שדגימות הסרום חודרות במלואן לתוך הממברנה, הופכים את הממברנה, שמים את הצד המחוספס (עם דגימות) עם הפנים כלפי מטה אל המיכל, והקצה עם הדגימות ממוקם באלקטרודה שלילית.
3) אלקטרופורזה: הפעל את ספק הכוח, 0.4～קרום 0.6 מ' A/cm, זמן הריצה הוא 30-45 דקות.לאחר הפעלת אלקטרופורזה, כבה את החשמל.
4) מכתים ומנקים: מוציאים את הממברנה מהמיכל, וטובליםit לתוך תמיסת הצבע למשך 5 דקות, ולאחר מכן נקה אותה בתמיסת הניקוי שוב ושוב במשך 3-4 פעמים עד שצבע הרקע ברור.יש להציג את חלבוני הסרום על הרצועות, ובדרך כלל ישנם חמישה אזורים, מהווים את הקצה העליון לקו המסומן, אלבומין, α1-גלולין, α2-גלולין, β-גלולין, γ-גלולין.
5) שימור: לשים את האלקטופורזה היבשהלְהִתְאַגֵדבתמיסת ניקוי למשך 10-15 דקות, ולאחר מכן הוציאו אותו והדביקו אותו על כוס נקייה, לאחר שהוא יתייבש, הוא יהפוך לסרט שקוףלְהִתְאַגֵד.
לְנַסוֹתתוֹצָאָה
השפעת ההפרדה של דגימות סרום טובה, ואין תופעת זנב להקה.יכולת החזרה של התוצאות משתנה עקב נהלי הבדיקה ושיטות הנסיין, והחזרה גבוהה.
סיכום
מערכת זיהוי האלקטרופורזה הקלינית המהירה (מיכל אלקטרופורזהDYCP-38C,ספק כוחDYY-6C וטעינת מדגם מעולה WD-9404) מיוצר על ידי שלנוחברת Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdעומד בדרישות הניסוי,והתוצאות ניתנות לשחזור, פשוטות ומהירות, מתאימותהוֹרָאָהמחקר.
בייג'ינג ליויביוטכנולוגיה ושות' בע"מ מתמחה בייצור מוצרי אלקטופורזה לתעשיית מדעי החיים, אשרבעלת היסטוריה של יותר מ-50 שנה בסין והחברה יכולה לספק מוצרים יציבים ואיכותיים בכל רחבי העולם.לאורך שנים של פיתוח, זה ראוי לבחירתך!
אנו מחפשים כעת שותפים, גם מיכל אלקטרופורזה OEM וגם מפיצים יתקבלו בברכה.
למידע נוסף עלינו, אנא צור איתנו קשר במייל[מוגן באימייל]אוֹ[מוגן באימייל].
זמן פרסום: 14 בנובמבר 2022