יש לזכור מספר שיקולים בעת שימוש באלקטרופורזה של קרום תאית אצטט (2)

חלקנו מספר שיקולים בשבוע שעבר לשימוש באלקטרופורזה של קרום תאית אצטט, ונסיים את הנושא הזה כאן היום לעיונך.

מבחר של ריכוז מאגר

ריכוז המאגר המשמש באלקטרופורזה של קרום תאית אצטט הוא בדרך כלל נמוך מזה המשמש באלקטרופורזה של נייר.ה-pH הנפוץ 8.6Bחיץ ארביטלי נבחר בדרך כלל בטווח של 0.05 מול/ליטר עד 0.09 מול/ליטר.בעת בחירת הריכוז, מתקבלת קביעה ראשונית.לדוגמה, אם אורך רצועת הממברנה בין האלקטרודות בתא האלקטרופורזה הוא 8-10 ס"מ, נדרש מתח של 25V לכל סנטימטר של אורך הממברנה, ועוצמת הזרם צריכה להיות 0.4-0.5 mA לכל ס"מ של רוחב הממברנה.אם ערכים אלה אינם מושגים או עולים עליהם במהלך האלקטרופורזה, יש להגדיל או לדלל את ריכוז המאגר.

ריכוז חיץ נמוך מדי יגרום לתנועה מהירה של הרצועות ולהגדלת רוחב הרצועה.מצד שני, ריכוז חיץ גבוה מדי יאט את נדידת הלהקה, ויקשה על הבחנה בין פסי הפרדה מסוימים.

יש לציין שבאלקטרופורזה של ממברנת תאית אצטט, חלק ניכר מהזרם מוליך דרך הדגימה, מה שיוצר כמות ניכרת של חום.לפעמים, ריכוז החיץ הנבחר עשוי להיחשב מתאים.עם זאת, בתנאים של טמפרטורת סביבה מוגברת או בשימוש במתח גבוה יותר, אידוי המים עקב החום עלול להתעצם, ולגרום לריכוז חיץ גבוה מדי ואף לגרום להתייבשות הממברנה.

נפח דגימה

באלקטרופורזה של ממברנת תאית אצטט, כמות נפח הדגימה נקבעת על ידי גורמים שונים, כולל תנאי אלקטרופורזה, תכונות הדגימה עצמה, שיטות צביעה וטכניקות זיהוי.כעיקרון כללי, ככל ששיטת הזיהוי רגישה יותר, נפח הדגימה יכול להיות קטן יותר, וזה יתרון להפרדה.אם נפח הדגימה מוגזם, דפוסי ההפרדה האלקטרופורטיים עשויים שלא להיות ברורים, והצביעה יכולה להיות גם גוזלת זמן.עם זאת, בעת ניתוח כמותי של הרצועות המוכתמות המופרדות באמצעות שיטות זיהוי קולורימטריות elution, נפח הדגימה לא צריך להיות קטן מדי, שכן זה יכול לגרום לערכי ספיגה נמוכים יותר עבור רכיבים מסוימים, מה שמוביל לשגיאות גבוהות יותר בחישוב התוכן שלהם.במקרים כאלה, יש להגדיל את נפח הדגימה כראוי.

בדרך כלל, נפח הדגימה שנוסף על כל סנטימטר של קו היישום של הדגימה נע בין 0.1 ל-5 μL, שווה ערך לכמות דגימה של 5 עד 1000 מיקרוגרם.לדוגמה, בניתוח אלקטרופורזה שגרתית של חלבון בסרום, נפח הדגימה שנוסף על כל סנטימטר של קו היישום אינו עולה בדרך כלל על 1 μL, שווה ערך ל-60 עד 80 מיקרוגרם חלבון.עם זאת, כאשר מנתחים ליפופרוטאינים או גליקופרוטאין באמצעות אותה שיטת אלקטרופורזה, יש להגדיל את נפח הדגימה בהתאם.

לסיכום, יש לבחור את נפח הדגימה המתאים ביותר בהתבסס על תנאים ספציפיים באמצעות סדרה של ניסויים ראשוניים.

בחירת תמיסת צביעה

הרצועות המופרדות באלקטרופורזה של ממברנת תאית אצטט מוכתמות בדרך כלל לפני זיהוי.רכיבי דגימה שונים דורשים שיטות צביעה שונות, ושיטות הצביעה המתאימות לאלקטרופורזה של קרום תאית אצטט עשויות שלא להיות ישימות לחלוטין על נייר סינון.

ישנם שלושה עקרונות עיקריים לבחירת פתרון צביעה עבורםקרום אצטט תאית.קוֹדֶם כֹּל,יש להעדיף צבעים מסיסים במים על פני צבעים מסיסים באלכוהול כדי למנוע התכווצות ממברנות ועיוות הנגרמים מתמיסת הצביעה של האחרון.לאחר הצביעה, חשוב לשטוף את הממברנה במים ולמזער את משך הצביעה.אחרת, הממברנה עשויה להתכרבל או להתכווץ, מה שישפיע על הגילוי הבא.

שנית, עדיף לבחור צבעים בעלי זיקה חזקה לצביעה לדגימה.באלקטרופורזה של ממברנת תאית אצטט של חלבוני סרום, נעשה שימוש נפוץ ב-amino black 10B בגלל הזיקה החזקה שלו לצביעה לרכיבי חלבון סרום שונים ויציבותו.

שלישית, יש לבחור צבעי איכות אמינים.חלק מהצבעים, למרות אותו השם, עשויים להכיל זיהומים שגורמים לרקע כהה במיוחד לאחר צביעה.זה אפילו יכול לטשטש את הרצועות המופרדות היטב במקור, מה שקשה להבחין ביניהן.

לבסוף, הבחירה בריכוז תמיסת צביעה חשובה.תיאורטית, נראה שריכוז תמיסת צביעה גבוה יותר יוביל לצביעה יסודית יותר של רכיבי הדגימה ולתוצאות צביעה טובות יותר.אולם, אין זה המקרה.לזיקה הקישורית בין מרכיבי הדגימה לצבע יש גבול מסוים, שאינו עולה עם העלייה בריכוז תמיסת הצביעה.להיפך, ריכוז תמיסת צביעה גבוה מדי לא רק מבזבז את הצבע אלא גם מקשה על השגת רקע ברור.יתרה מכך, כאשר עוצמת הצבע מגיעה לערך מרבי מסוים, עקומת הספיגה של הצבע אינה עוקבת אחר קשר ליניארי, במיוחד במדידות כמותיות. באלקטרופורזה של ממברנה של תאית אצטט, ריכוז תמיסת הצביעה נמוך בדרך כלל מזה המשמש באלקטרופורזה של נייר.

פרטים שכדאי לדעת על ביוטכנולוגיה של בייג'ינג Liuyi's קרום אצטט תאיתמיכל אלקטרופורזה ויישום האלקטרופורזה שלו, אנא בקר כאן:

לניסוי להפרדת חלבון בסרום על ידי קרום אצטט תאית

לאלקטרופורזה של קרום תאית אצטט

ליש לזכור מספר שיקולים בעת שימוש באלקטרופורזה של קרום תאית אצטט (1)

אם יש לך תוכנית רכישה כלשהי עבור המוצרים שלנו, אנא אל תהסס לפנות אלינו.אתה יכול לשלוח לנו הודעה במייל[מוגן באימייל]אוֹ[מוגן באימייל], או נא להתקשר אלינו בטלפון +86 15810650221 או הוסף Whatsapp +86 15810650221, או Wechat: 15810650221.

התייחסות:אלקטרופורזה (מהדורה שנייה) מאת מר לי